ROSGreen^TM H₂O₂ Probe 過(guò)氧化氫熒光探針

搜索關(guān)鍵詞：

Hydrogen Peroxide 過(guò)氧化氫；H₂DCFDA (DCFH-DA, DCFH)；BES-H2O2-Ac；APF 氨基苯基熒光素; Mitosox Red;

同義名：

ROSGreen^TM Hydrogen peroxide Probe；ROSGreen^TM Hydrogen peroxide sensor；ROSGreen^TM H₂O₂ sensor；

產(chǎn)品信息

背景需求

過(guò)氧化氫（Hydrogen peroxide, H₂O₂）是一種反映氧代謝副產(chǎn)物，用于許多氧化應(yīng)激相關(guān)態(tài)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，參與人體大量的生理和病理活動(dòng)，比如哮喘、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、神經(jīng)性衰退疾病和唐氏綜合征等，但目前對(duì)H₂O₂生成、積累、運(yùn)輸和功能的分子機(jī)制仍了解很少，zui大的限制在于缺乏靈敏且特異性H₂O₂探針，用于活細(xì)胞研究。目前能得到的H₂O₂反應(yīng)性探針的缺陷包括1）來(lái)自其他ROS比如過(guò)氧亞硝基陰離子（ONOO^-）、過(guò)氧化基（ROO•）、超氧化物（•O₂^–）的背景熒光干擾；2）對(duì)外源活化酶的需求；3）水缺乏水溶性或不兼容于水溶體系；4）以及紫外區(qū)域的激發(fā)光譜特征等。

產(chǎn)品描述

本ROSGreen^TM H₂O₂ Probe正是克服以上缺陷開(kāi)發(fā)的一款過(guò)氧化氫（H₂O₂）選擇性探針。探針本身無(wú)熒光，可見(jiàn)光區(qū)域內(nèi)無(wú)吸收峰。一旦接觸H₂O₂，瞬間激發(fā)熒光增加并伴隨可見(jiàn)波長(zhǎng)吸收帶的生成（Ex/Em= 490/514nm）。因其二元的吸收/發(fā)射熒光反應(yīng)，此探針具有較大的動(dòng)力學(xué)范圍。與相似的ROS比如O₂^–，NO，或OCl^-相比，ROSGreen^TM H₂O₂ Probe對(duì)H₂O₂呈現(xiàn)出＞100倍（100-fold）的選擇性。

注意事項(xiàng)

1）   本品的DMSO儲(chǔ)存液需分裝成單次用量后，-20ºC避光保存，避免反復(fù)凍融。所有工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

2）   整個(gè)操作過(guò)程中注意避光。

3）   為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法【詳見(jiàn)懋康內(nèi)容】

1、   儲(chǔ)存液制備

將低溫保存的產(chǎn)品從冰箱取出，置于室溫回溫至少20min。低速離心3-5min。之后往瓶?jī)?nèi)加入適量無(wú)水DMSO充分溶解配成2~5mM儲(chǔ)存液（比如，1mg ROSGreen^TM H₂O₂ Probe（Mw: ~ 600）加入333μl DMSO，充分溶解混勻后即得到5mM儲(chǔ)存液）。按照單次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，至少3個(gè)月穩(wěn)定。

2、   工作液準(zhǔn)備

正式實(shí)驗(yàn)前，或取粉末按照【儲(chǔ)存液制備】用DMSO溶解，或于室溫融化一管DMSO儲(chǔ)存液。

2.1 對(duì)于溶液H₂O₂測(cè)定，按照2~20μM工作液濃度制備2×工作液，用20mM Hepes緩沖液或其他緩沖液（pH 7.0）稀釋儲(chǔ)存液。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。建議使用5μM終濃度的ROSGreen^TM H₂O₂ Probe，測(cè)定溶液體系中H₂O₂濃度。

2.2 對(duì)于細(xì)胞H₂O₂測(cè)定，按照2~20μM工作液濃度制備1×工作液，用含20mM Hepes緩沖液的HBSS，pH 7.0 或PBS稀釋儲(chǔ)存液。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

3、   上清液H₂O₂測(cè)定

4、   活細(xì)胞H₂O₂測(cè)定

染色示例

圖1. Costar 黑色96孔培養(yǎng)板內(nèi)CHO-K1活細(xì)胞用ROSGreen^TM H₂O₂ Probe的染色圖。圖A：對(duì)照細(xì)胞；圖B：用H₂O₂（100μM）處理5min后的細(xì)胞；

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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