Stable化學感受態(tài)細胞（熱激法）
簡要描述：
Stable化學感受態(tài)細胞（熱激法）：Stable菌株是NEB公司開發(fā)的高轉(zhuǎn)化效率的大腸桿菌菌株，特別適合分離含重復元件和不穩(wěn)定插入序列的質(zhì)粒克隆，也適合分離和擴繁逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒載體克隆。
產(chǎn)品時間：2024-03-21
打印當前頁Stable Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態(tài)細胞
產(chǎn)品標簽：
Stbl3；Stbl2；HB101；Stable；Direct repeats 直接重復片段；Lentiviral expression vectors 慢病毒表達載體；Gibson Assembly 一步法克隆檢測試劑盒；
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2328-1000UL | Stable Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態(tài)細胞 | 10×100μl | 280 |
MF2328-5000UL | Stable Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態(tài)細胞 | 50×100μl | 1280 |
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產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2328-1000UL | MF2328-5000UL | ||
MF2328-A | Stable Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2328-B | Control Vector puC19, 10 pg/µl | 10μl | 10μl |
菌株描述
Stable菌株是NEB公司開發(fā)的高轉(zhuǎn)化效率的大腸桿菌菌株，特別適合分離含重復元件和不穩(wěn)定插入序列的質(zhì)粒克隆，也適合分離和擴繁逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒載體克隆。與商業(yè)化的同源重組反應體系比如NEBuilder HiFi DNA Assembly，Gibson Assembly反應體系和酶切連接體系都兼容。Stable菌株基因型與Stbl2，Stbl3沒有關(guān)聯(lián)性，但具有更優(yōu)異的性能（見圖1）?；蚪M含有重組酶recA1 relA1突變，能有效抑制長末端重復序列的重組，降低了錯誤重組的頻率。還含有核酸酶內(nèi)切酶endA1突變，避免了質(zhì)粒提取過程中核酸酶的污染，顯著提高制備質(zhì)粒的產(chǎn)量和質(zhì)量?；蚪M含有lacZΔM15，適用于藍白斑篩選。菌株本身含鏈霉素和四環(huán)素抗性，在成功轉(zhuǎn)化后賦予其額外的篩選標志。
Stable菌株基因型：F' proA+B+ lacIq ?(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ?(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ?lacX74 galK16 galE15 e14- Φ80dlacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ?(mrr-hsdRMS-mcrBC
菌株亮點
◇ Stable菌株具有很高的轉(zhuǎn)化效率，經(jīng)pUC19檢測轉(zhuǎn)化效率＞5×108 cfu/μg DNA；
◇ Stable菌株是基因克隆進入腺病毒/慢病毒載體的推薦宿主菌；
◇ Stable菌株是克隆正向重復序列和反向重復序列的推薦宿主菌；
◇ Stable菌株含recA1突變，能減少克隆DNA的重組發(fā)生，從而降低錯誤重組頻率；
◇ Stable菌株含mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)，能有效轉(zhuǎn)化真核來源的甲基化DNA或PCR、cDNA和許多其他來源的非甲基化DNA;
◇ Stable菌株含endA1（非特異核酸內(nèi)切酶I）突變，確保得到zui高質(zhì)量和產(chǎn)量的質(zhì)粒；
◇ Stable菌株含fhuA突變，具有對噬菌體T1的抗性；
◇ Stable菌株含lacZΔM15，適用于具α-互補載體的藍白斑篩選；
產(chǎn)品描述
本品是Stable菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率＞5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
Stable與Stbl3克隆性能（錯誤重組率）的比較
圖1. Stable與Stbl3克隆不穩(wěn)定DNA序列的性能比較。pUC-5xREP含5 x 32bp 重復序列，其在普通大腸桿菌中很不穩(wěn)定。酶切后線性化的pUC19片段2.2ng+1ng 5xREP DNA段配制成重組反應體系，重組反應完成后分別轉(zhuǎn)化Stable感受態(tài)細胞（A）或Stbl3感受態(tài)細胞（B），復蘇60min，涂布在含50μg/ml羧芐青霉素的LB平板，30℃培養(yǎng)20h。之后做菌落PCR，檢測5xREP DNA插入的穩(wěn)定性（含有正確插入片段的克隆，菌落PCR片段為623bp）。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】【詳見MKBIO內(nèi)容】
附表1 固體和液體LB培養(yǎng)基配方
附表2 固體和液體SOC培養(yǎng)基配方
附錄1. Stable感受態(tài)細胞常見問題【詳見MKBio內(nèi)容】
1. Stable菌株的基因型和各基因賦予菌株的特征？
Stable基因型：F' proA+B+ lacIq ?(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ?(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ?lacX74 galK16 galE15 e14- Φ80dlacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ?(mrr-hsdRMS-mcrBC
◇ 藍白斑篩選（Φ80 Δ(lacZ)M15）：使得β-gal omega段。lacX74去除染色體上的β-gal基因。pUC19和相似基因編碼β-半乳糖苷酶（lacZ）的α肽。α肽與β-半乳糖苷酶的omega段（由F'攜帶，α-互補）結(jié)合。當β-半乳糖苷酶按照這種方式重新組合后能正常表達并切割X-gal生成藍斑。當克隆DNA進入質(zhì)粒破壞α肽基因，使得菌落為白斑。
◇ 重組缺陷（recA1）：大腸桿菌（E. coli）本身具修復系統(tǒng)能重組同源序列。基因組克隆通常有復制區(qū)，recA介導的重新排列不確定，特別當同源序列長于50bp。recA功能缺失的菌株比recA+菌株通常更緩慢生長。
◇ 內(nèi)切酶I缺陷（endA1）：野生型大腸桿菌的周質(zhì)空間含非特異性內(nèi)切酶。從這些菌株中制備質(zhì)粒特別要注意質(zhì)粒被降解。endA突變?nèi)コ@個基因，顯著改善了質(zhì)粒制備物的質(zhì)粒。
◇ 限制缺陷（Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)）：野生型大腸桿菌K12菌株含限制性內(nèi)切酶，能切割含位點(AAC(N6)GTGC和GCAC(N6)GTT的DNA。雖然大腸桿菌DNA自身受保護，不被同源甲基轉(zhuǎn)移酶所降解，但外源DNA會在這些位點被切割。限制缺陷刪減了甲基轉(zhuǎn)移酶和內(nèi)切酶的基因。
◇ 甲基限制缺陷（mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)）：大腸桿菌具有一套酶系統(tǒng)，mcrA，mcrB和mrr能夠切割在高等真核生物和某些植物、細菌菌株發(fā)現(xiàn)的甲基化DNA。來自PCR擴增片段，cDNA或原先在大腸桿菌內(nèi)擴繁的DNA不會被甲基化，也不會被切割。
◇ T1噬菌體抗性（fhuA）：T1，一種烈性噬菌體需要大腸桿菌羥肟酸鐵吸收受體用來感染。這個基因的刪減賦予對這個噬菌體的抗性，且不會顯著影響轉(zhuǎn)化或細胞的生長特征。
2. Stable感受態(tài)細胞能替換Stbl2或Stbl3嗎?
答復：是的
3. Stable感受態(tài)細胞適合大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化？
答復：是的
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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