Rhod-4 AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針

（長波長Ca²⁺熒光探針Rhod-2的升級版本）

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Rhod-4 AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針；Rhod-2, AM；可見光激發(fā)波長Ca²⁺熒光探針；Fluo-4；Fluo-8 AM；CAS NO：129787-64-0；

產(chǎn)品描述

Rhod-2雖然是受換迎的紅色熒光Ca²⁺熒光探針，但Rhod-2的線粒體定位和細胞中高基底Ca²⁺信號使其在某些細胞應用中嚴重受限制。另外，Rhod-2在488nm處很不理想的激發(fā)波長使其在某些只有488nm激發(fā)光源的儀器比如FLIPR^TM上信號很弱。

Rhod-4正是根據(jù)這些缺陷而改進的，具有以下特征：

A）Rhod-4的大激發(fā)和發(fā)射波長是530nm和555nm。雖Rhod-4大激發(fā)波長是530nm，但在488nm處

激發(fā)下的信號也相當強（見Fig 1）。除了能在514nm，532nm和546nm的長波長激發(fā)之外，Rhod-4用氬離子激發(fā)器在488nm激發(fā)下也能得到理想的熒光信號。Rhod-4隨著增加的Ca²⁺濃度熒光信號而增強（555nm發(fā)射波長），一旦與Ca²⁺結合熒光約增強＞200倍。由于許多細胞受刺激后的Ca²⁺濃度提高通常是5~10倍，因此，Rhod-4是一款優(yōu)秀的檢測此范圍內Ca²⁺濃度變化的高靈敏探針。

Fig 1, Rhod-4鈉鹽在含氯化鈣體系內的激發(fā)光譜特征。

一旦受激動劑刺激后，Rhod-4在細胞內的熒光明顯強于Rhod-2（信噪比）。更重要的是，Rhod-4主要

定位在細胞胞漿內，不像Rhod-2主要定位在線粒體。另外，Rhod-4具更低的溫度依賴性的細胞加載特性，不管室溫還是37℃產(chǎn)生相似的結果。這一特征使Rhod-4比Rhod-2在HTS應用中更有優(yōu)勢。

Rhod-4, AM是Rhod-2的一種乙酰甲酯衍生物，具有細胞膜滲透性，只需簡單培養(yǎng)，即可輕易進入細胞。一旦進入細胞內，即被其內酯酶剪切生成不具膜滲透性的Rhod-4，從而滯留在胞內以發(fā)揮相應生理功能。本品以凍干粉的形式提供，使用時只需經(jīng)無水DMSO充分溶解，配置成2~5mM的儲存液，并依據(jù)具體實驗和相關文獻資料調整到需要的工作濃度即可。

基本特性：

1）    同義名：Rhod-4, Acetoxymethyl Ester 

2）    分子量：1015.96

3）    外觀：紅色固體

4）    大激發(fā)/發(fā)射波長：530/555 nm

5）    K_d（Ca²⁺結合）：525nM

6）    溶解性：溶于DMSO（2~5mM）

注意事項

1. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
2. 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后請在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。
3. Rhod-4, AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內，可在20-25℃溫育片刻至全部融解后使用。
4. Rhod-4, AM*次使用，建議儲存液現(xiàn)配現(xiàn)用，分裝成單次用量，嚴格做到≤-20℃密封干燥凍存，以防止受潮。為了保證良好的實驗效果，盡量在短時間內使用。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據(jù)具體的實驗條件做出調整。

A. 試劑準備

1. 配制Pluronic F-127母液： 稱取100mg Pluronic F-127粉末（貨號：MS4301-1G）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存，不用冷藏。如有結晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。
2. HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理緩沖液

B，操作步驟

7） 用適當?shù)膬x器如激光共聚焦、流式細胞儀、熒光酶標儀，以及波長Ex/Em=530/555 nm來進行檢測。

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Rhod-4 AM 鈣離子熒光探針

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