Zeocin (Powder) 博萊mei素

產(chǎn)品標簽

Zeocin 博萊mei素（博來mei素）；Phleomycin 腐草霉素；Sh ble基因；Hygromycin B潮霉素B；G418 遺傳霉素；CAS NO.：11006-33-0

產(chǎn)品信息

【提示1】：另現(xiàn)貨供應Invitrogen*的Zeocin（博來mei素）；

【提示2】：另現(xiàn)貨供應母液形式的Zeocin（博來mei素），使用更便捷，且價格更經(jīng)濟。

【提示3】：對Zeocin不敏感的細胞，如絲狀真菌和一些酵母菌，建議使用腐草mei素（貨號：MS0008-1ML），抗性基因同樣為Sh ble。

【提示4】：*含Zeo+基因序列的質(zhì)粒— pcDNA 3.1/Zeo（+）（Invitrogen of Thermo），序列圖譜點擊下載文檔。

產(chǎn)品描述

Zeocin是一種作用于真核和原核細胞的選擇性抗生素。來自Streptoalloteichus hindustanus的Sh ble基因賦予Zeocin抗性，該基因編碼一種13,665Da大小的蛋白，以化學計量方式結合Zeocin，抑制其DNA雙鏈切割活性。因此，能表達此蛋白的真核和原核宿主細胞具有Zeocin抗性。

Zeocin是腐草霉素D1（Phleomycin D1）的商業(yè)名稱，是一種銅離子螯合的糖肽抗生素（來源于鏈霉菌Streptomyces verticillus的突變株），銅離子的存在使其呈藍色，此銅螯合的形式為無活性。當抗生素進入細胞后，二價銅離子（Cu²⁺）被還原為一價銅離子（Cu⁺），并被細胞內(nèi)的巰基化合物去除。銅離子被去除后，Zeocin被活化，嵌入DNA使其斷裂，終導致細胞死亡。Zeocin作用譜廣泛，對細菌、真核微生物、植物和哺乳動物細胞具很強的毒性。

本品以藍色粉末形式提供，低內(nèi)毒素水平，達細胞培養(yǎng)級。通常情況，哺乳動物細胞的篩選濃度范圍是50-400 µg/ml，細菌的篩選濃度為25 µg/ml。

我司還提供無菌溶液形式的Zeocin（貨號：MS0009-125MG，MS0009-1000MG），濃度是100mg/ml，使用起來更加方便，只需直接加入培養(yǎng)基到所需工作濃度即可。

產(chǎn)品特性

1） CAS NO.：11006-33-0

2） 外觀：藍色粉末

3） 內(nèi)毒素：＜1 EU/mg

4） 溶解性：易溶于水（>500 mg/ml）

5） 質(zhì)量控制：分別對Zeocin敏感或Zeocin耐性的哺乳動物細胞測定抗生素活性。

保存與運輸方法

保存： +4℃干燥保存，至少1年有效。

運輸：室溫運輸。

注意事項

1） Zeocin粉末容易受潮，一定要注意干燥保存。每一次使用完后需蓋緊管子。

2） Zeocin是一種不穩(wěn)定化合物，在高pH和低pH或存在弱氧化劑的情況下會發(fā)生不可逆變性。

3） Zeocin對高濃度酸和堿都很敏感，但短期暴露在弱酸下能耐受。

4） Zeocin對光敏感，需將抗生素，或含該抗生素的平板或培養(yǎng)基置于黑暗處。

5） Zeocin有毒，操作時需注意防護，切勿與身體或皮膚直接接觸。

6） Zeocin™是Invivogen公司的商標產(chǎn)品。

7） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

母液制備

1）將低溫保存的Zeocin置于室溫回溫至少20min，加入適量HEPES buffer（5g/L, pH 7.2±0.1），充分溶解，配制成100mg/ml溶液。2）用0.22µm濾膜過濾除菌。3）溶液置于4℃保存12個月有效，或-20℃保存，18個月有效。

操作步驟（以哺乳動物細胞為例）

【注1】：Zeocin的殺滅機制不同于新生霉素（neomycin）和潮霉素B（hygromycin B），細胞不會聚集成團和從培養(yǎng)板表面脫落。一旦接觸到Zeocin，敏感細胞會出現(xiàn)如下的形態(tài)變化：1）細胞體積明顯增加（類似于巨細胞病毒感染容納性細胞引起的腫大效應）；2）異常的細胞形狀包括細胞長臂（long appendages）出現(xiàn)；3）胞漿內(nèi)出現(xiàn)大型空泡（源于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體或支撐蛋白的破裂）；4）質(zhì)膜和核膜破裂，導致膜上出現(xiàn)許多孔。這些敏感細胞終會*破損，僅僅以細胞碎片的形式存在。

【注2】：Zeocin抗性細胞按正常周期分化產(chǎn)生不同于敏感細胞的克隆?？剐约毎谛螒B(tài)上，與未接觸Zeocin™的正常細胞沒有任何差異。

【注3】：Zeocin用于哺乳動物細胞篩選常用濃度為50-1000µg/ml（平均常用濃度為250-400μg/mL），影響篩選濃度的主要因素包括離子強度，細胞類型，細胞密度以及生長速率。以下步驟僅作參考，請根據(jù)自身實驗體系做適當調(diào)整。

一、細胞對Zeocin敏感性的確定（殺滅曲線建立）

• 重新鋪板或者將滿盤細胞重新分盤，使得細胞密度約25%，按照8個平板/組準備，培養(yǎng)24h，去除舊培養(yǎng)基。

• 加入含不同濃度Zeocin的篩選培養(yǎng)基，Zeocin濃度可設置為0, 50, 100, 200, 400, 600, 800和1000 μg/ml，每個濃度做3個平行；也可根據(jù)自身實驗體系，設置不同的濃度梯度。

• 每3-4天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察存活細胞的比例。選擇在合適時間（1-2周內(nèi)）殺死大多數(shù)細胞的濃度為加工作濃度?！?/span>注】：若是難以在顯微觀察下區(qū)分活細胞，建議使用臺盼藍染色來計算存活細胞的數(shù)量，以確定Zeocin的適濃度。

二、篩選穩(wěn)定轉染細胞系

• 轉染細胞，用100mm培養(yǎng)皿進行培養(yǎng)。以未轉染的細胞作為陰性對照。

• 轉染后，用預熱的1X PBS洗滌一次，加入新鮮培養(yǎng)基。

• 轉染48-72h后，用含有加濃度Zeocin（由滅殺曲線確定）的新鮮培養(yǎng)基篩選細胞。為了更好的鑒定和篩選細胞集落，建議將細胞按比例稀釋成一系列濃度。

【注】：若待篩選細胞對Zeocin的抗性明顯強于大部分細胞，按照以下方法克服此類耐性：用含Zeocin培養(yǎng)基進行細胞分盤，置于37°C孵育2-3h，使得細胞貼壁。然后將細胞置于4°C，2h。記得使用Hepes作為培養(yǎng)基的緩沖體系。重新將細胞置于37°C孵育。4°C孵育細胞的目的是短時間內(nèi)終止細胞分化，使得Zeocin能發(fā)揮作用，殺死細胞。

• 每3-4天更換新鮮的選擇培養(yǎng)基，直到出現(xiàn)細胞集落。

• 挑選并轉移克隆到96或48孔板中。在進行更大孔徑培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿上擴大培養(yǎng)之前，確保培養(yǎng)細胞密度近。

三、穩(wěn)定轉染細胞系的維持培養(yǎng)

可采取以下方式維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉染細胞：

1）使用含相同劑量Zeocin的篩選培養(yǎng)基來維持培養(yǎng)；

2）降低Zeocin劑量為原來的一半進行維持培養(yǎng)；

3）使用正好能預防敏感細胞生長但不足以致死的Zeocin劑量來維持培yang【根據(jù)殺滅曲線來判斷】。

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附表一 某些哺乳動物細胞的Zeocin工作濃度

Zeocin常用的工作濃度為100μg/ml，但是，加的工作濃度需要根據(jù)細胞類型和實際的實驗體系來確定。某些哺乳動物細胞的建議工作濃度列在下表：

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

Zeocin （Powder） 博萊mei素 抗生素

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