MTT Cell Proliferation Assay Kit

MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

搜索關鍵詞：

MTT 噻唑蘭；臺盼藍染色法；CCK-8 細胞增殖和毒性檢測試劑盒；WST-8；CAS：298-93-1；

基本描述：

噻唑蘭（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, 簡稱MTT，CAS：298-93-1），也稱作溴化噻唑藍四氮唑，是一種黃色染料，已經廣泛替代傳統(tǒng)的臺盼藍染色法或者放射性同位素插入法，用來檢測細胞活力、細胞增殖以及毒性分析。MTT是一種可接受氫離子的化合物染料，帶正電荷，具有細胞膜滲透性?；罴毎€粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠將外源進入的MTT還原成為水不溶性的藍紫色MTT-甲臜結晶，而死細胞不具此功能。甲臜結晶不能穿透細胞膜，因此沉積在處于增殖且未受損傷的細胞內。在特定溶劑的作用下*溶解甲臜結晶，然后通過酶標儀測定570 nm附近的吸光度。細胞增殖越多，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。

本MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）采用*的甲臜溶解液，能夠非常好的*甲臜結晶，使檢測本底低、靈敏度高，且線性范圍寬。

產品組分

注意事項

• 使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。①由于96孔板周圍一圈容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS、無菌水或培養(yǎng)液；②可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內水源的地方以緩解蒸發(fā)。

• MTT溶液在低溫下會凝固，請置于室溫或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后再使用。

• MTT溶液需盡量減少反復凍融的次數(shù)，若單次用量很少，建議根據(jù)需求分裝后置于-20℃保存。MTT溶液顏色如變?yōu)榛揖G色，請勿使用。

4） 甲臜溶解液當置于-20℃保存需解凍使用，或室溫保存產生沉淀，可置于37℃水浴孵育以促進溶解，并且必須全部溶解后混勻使用。

5） 加入甲臜溶解液后請輕輕混勻，但需注意避免產生泡沫。亦可借助顯微鏡觀察甲臜是否*溶解。

6） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法（以96孔板為例）

• 收集對數(shù)生長期的細胞，用含血清的培養(yǎng)液配制成單細胞懸液，調整細胞密度，以每孔3000-10,000個細胞接種到96孔板，每孔體積100µl，培養(yǎng)板的邊緣孔用無菌PBS填充。設置空白孔和對照孔。

【注①】：通常情況，細胞增殖實驗每孔加3000個細胞，細胞毒性實驗每孔加6000個細胞。具體每孔所用細胞數(shù)目，需根據(jù)細胞大小、增殖速度的快慢等來決定。

【注②】：需設置空白孔（不含細胞，含培養(yǎng)液、MTT和甲臜溶解液），對照孔（含細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養(yǎng)液、MTT和甲臜溶解液），每組設置3個復孔。

• 37℃，5% CO₂繼續(xù)培養(yǎng)或根據(jù)實驗具體需求進行培養(yǎng)，一般培養(yǎng)6-24h。

• 根據(jù)實驗具體需求，給予0-20µl干預藥物處理，37℃，5% CO₂繼續(xù)培養(yǎng)至合適時間。

• 小心吸掉培養(yǎng)液，每孔加入100µl新鮮培養(yǎng)液，再加入10µl MTT溶液（5 mg/ml），加樣時盡量勤換槍頭，控制加量誤差。繼續(xù)培養(yǎng)4h。

• 小心吸掉培養(yǎng)液，每孔加入110µl 甲臜溶解液，置搖床上低速振蕩10min，使得結晶物充分溶解。可在光學顯微鏡下觀察結晶物是否*溶解。如果紫色結晶較小或較少，溶解的時間會短些；如果紫色結晶較大或較多，溶解的時間會長些。

• 在酶標儀上搖勻后，選擇570nm，測定吸光度。記錄結果，比色以空白調零。

【注①】：對于細胞毒性檢測，以未經藥物處理細胞的OD值為hao的，然后計算藥物處理細胞所占的比率（x），公式如下：OD（未經藥物處理細胞）/OD（藥物處理細胞）hao的。然后建立直方圖。

相關產品

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產品。

細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒