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植物原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化試劑盒  植物細胞培養(yǎng)

植物原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化試劑盒 植物細胞培養(yǎng)

簡要描述:

植物原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化試劑盒 植物細胞培養(yǎng) ,原生質(zhì)體(Protoplast)是指植物細胞去掉細胞壁后的裸露部分,體外培養(yǎng)條件下,具有以下功能:1)具全能型,可再生細胞壁,進行連續(xù)的細胞分裂且能再生成完整植株的能力;2)具攝取外源大分子、細胞器,以及細菌、病毒的能力,從而原生質(zhì)體是進行遺傳操作,基因轉(zhuǎn)移的良好材料。

產(chǎn)品時間:2024-03-20

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Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated)

植物原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化試劑盒(PEG法)

 

產(chǎn)品關(guān)鍵詞:

Plant Protoplast 植物原生質(zhì)體;PEG-mediated protoplast transformation 聚乙二醇介導的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化;Yakult Honsha;Cellulase R-10 纖維素酶R-10;Macerozyme R-10 離析酶R-10;二乙酸熒光素 (FDA) 原生質(zhì)體活力檢測;

 

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

價格(元)

Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated)

MX7381-20T

20T

750

【溫馨提示】:見我司(MKBio)整理植物細胞壁降解酶/消化酶產(chǎn)品專題。

 

產(chǎn)品描述

原生質(zhì)體(Protoplast)是指植物細胞去掉細胞壁后的裸露部分,體外培養(yǎng)條件下,具有以下功能:1)具全能型,可再生細胞壁,進行連續(xù)的細胞分裂且能再生成完整植株的能力;2)具攝取外源大分子、細胞器,以及細菌、病毒的能力,從而原生質(zhì)體是進行遺傳操作,基因轉(zhuǎn)移的良好材料;3)通過同種和異種植物的原生質(zhì)體融合,可產(chǎn)生異核體,實現(xiàn)體細胞雜交,從而培育出具有抗病原或更高產(chǎn)量的新品種。

原生質(zhì)體(Protoplast)的制備主流的技術(shù)是酶解法,因其具有消化溫柔,操作簡單,且良好維持原生質(zhì)體完整性的特點。工作原理是根據(jù)植物細胞壁的結(jié)構(gòu)特征選擇合適的酶進行處理,植物細胞壁主要由多糖(纖維素、半纖維素、果膠等)以及少量的蛋白和脂質(zhì)構(gòu)成。因此,通過使用纖維素酶、離析酶、半纖維素酶、果膠酶等復合酶來降解細胞壁,即可得到原生質(zhì)體。

原生質(zhì)體(Protoplast)的轉(zhuǎn)化方法很多,主要有PEG介導轉(zhuǎn)化法、電機穿孔轉(zhuǎn)化法、脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)化法、農(nóng)桿菌共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法等。

本試劑盒是PEG介導的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法,操作簡單和便捷。試劑盒含有植物原生質(zhì)體制備(不包含消化酶)和植物轉(zhuǎn)化需要的所有試劑,按照單次10ml酶液體系來算,可做20次。

 

試劑盒組分

組分編號

組分名稱

規(guī)格(20T

儲存方法

MX7381-A

Solution A-Enzyme solution buffer (2×) 溶液A

100ml

-20℃保存

MX7381-B

Solution B-W5 solution 溶液B

200ml

-20℃保存

MX7381-C

Solution C-MMG solution溶液C

25ml

-20℃保存

MX7381-D

Solution D-Transformation solution溶液D

2.5ml

-20℃保存

MX7381-E

Solution E-WI solution溶液E

25ml

-20℃保存

MX7381-F

Solution F-Reduced reagent溶液F

1ml

RT保存

MX7381-G

Solution G-BSA solution (50mg/ml)

5ml

-20℃保存

 

注意事項

為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

  • 需要準備材料
    • 離析酶R-10(比如,Cat#:MX7351-1G, MKBio)
    • 纖維素酶R-10(比如,Cat#:MX7352-1G, MKBio)
    • 70μm細胞篩網(wǎng)(比如,Cat#:352350, BD Bioscience)
    • 平頭鑷子
    • 一次性刀片
    • 1.5ml離心管
    • 50ml離心管
    • 恒溫加熱水浴鍋

 

  • 原生質(zhì)體分離

2.1 按照以下表格體系,配制即用型酶溶液:【注意:此溶液現(xiàn)配現(xiàn)用】

組分

10ml配制量

50ml配制量

溶液A (2×酶溶解液)

5ml

50ml

離析酶R-10

40mg

200mg

纖維素酶R-10

150mg

750mg

溶液F(還原劑)

5 μl

25μl

溶液G(50mg/ml BSA

0.2ml

1ml

無菌水

定容到10ml

定容到50ml

2.2 取生長狀態(tài)良好的葉片切成0.5-1mm的小條,按照20個葉片加10ml即用型酶溶液的比例迅速將切好的葉片小條浸泡于即用型酶溶液內(nèi),室溫避光酶解3h。

【注意】:酶解時間與葉片類型、葉片生長狀態(tài)有關(guān),請根據(jù)實際實驗進行調(diào)整。酶溶液變?yōu)榫G色表明原生質(zhì)體已經(jīng)分離,顯微鏡鏡檢確定是否分離。

2.3 酶解后加入10ml溶液B,輕柔混勻。

2.4 70μm細胞篩網(wǎng)過濾步驟2.3獲得的溶液,去除未消化的葉片和雜質(zhì),收集濾液到50ml離心管內(nèi)。

2.5 濾液于100×g,室溫離心2min,吸掉上清。

2.6 加1ml溶液B重懸原生質(zhì)體,冰浴30min,使得原生質(zhì)體自然沉淀到底部。

2.7 小心吸掉上清,不要觸動原生質(zhì)體沉淀。將沉淀重懸于1ml溶液C,即得到原生質(zhì)體溶液。

  • 原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化
  • 原生質(zhì)體培養(yǎng)和收集

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術(shù)領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承以人為本,以誠為信、合同守信的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

 

植物原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化試劑盒  植物細胞培養(yǎng)

植物原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化試劑盒  植物細胞培養(yǎng)

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